Le dosage de cystine
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Neil Dalton MA PhD
Guy’s Hospital/King’s College, Londres – Royaume-Uni
La mesure des concentrations de cystine dans les globules blancs
(leucocytes) reste, après 30 ans, la pierre angulaire du diagnostic et des
évaluations ultérieures du traitement de la cystinose.
À certains égards, bien qu’elle ait été très utile aux patients et aux
cliniciens, cette procédure classique peut sembler dépassée et avoir grand
besoin d’un changement. Cependant, notre compréhension de la cystinose, et plus particulièrement de sa thérapeutique,
repose majoritairement sur les données générées grâce à cette méthode.
Les échantillons de sang doivent être prélevés dans des tubes
contenant de l'héparine ou le mélange acide-citrate-dextrose
(ACD) et les globules blancs doivent être préparés dans le jour suivant; tout
retard dans l’isolement des cellules augmente rapidement les risques de
résultats non fiables. Cette “fenêtre de 24 h” permet d’envoyer les
échantillons par coursier à un laboratoire possédant un service spécialisé
capable d'effectuer en routine le dosage de la cystine leucocytaire.
La préparation cellulaire standard produit une population mixte
de globules blancs, mais certains laboratoires considèrent qu'une préparation
plus spécifique des cellules polynucléaires présente certains avantages. Les
résultats fournis par cette dernière sont en moyenne le double de ceux obtenus
sur la préparation de l'ensemble des globules blancs, mais leur utilité sur le
plan clinique, en partie du fait de la variabilité de la préparation et de
l’analyse, est exactement la même.
Une fois les globules blancs préparés, ils doivent être lysés
(fragmentés) afin d’en libérer la cystine. À cette phase, les échantillons
peuvent être congelés indéfiniment à –70 C sans plus subir de
détérioration. Le résultat final nécessite la mesure de la concentration de la
cystine dans la partie liquide et du contenu en protéines des débris
cellulaires. Ces deux analyses sont aussi importantes l’une que l’autre. Le
dosage des protéines est particulièrement dépendant du matériel d'étalonnage;
on utilise généralement l’albumine du sérum de bœuf. La mesure de la cystine
est généralement effectuée au moyen d’une technique de dosage basée sur la
fixation compétitive d’une protéine se liant à la cystine (CBP) qui provient de
E. coli, qui est une méthode extrêmement
sensible et spécifique. La cystine peut également être mesurée par
chromatographie sur résine échangeuse d’ions ou, après réduction sous forme de
cystéine totale, par détection électrochimique, fluorimétrique
ou en spectrométrie de masse.
Dans un même laboratoire, si le contrôle de qualité des
procédures d’analyse garantit la fiabilité des résultats finaux, il faut
cependant être conscient que ces derniers sont variables. L’année dernière,
pour les 27 dosages effectués dans mon laboratoire, la variabilité des dosages
des protéines et de la cystine était respectivement de 7 % et 16 %.
Le résultat final pour notre échantillon témoin a varié de 16,7 % ;
la valeur moyenne était de 1,84 nmol hémicystine/mg de protéine, avec des résultats compris
entre 1,36 et 2,59. Le problème de la variabilité entre divers laboratoires, en
particulier pour ceux faisant appel à des techniques différentes, n’a pas fait
l’objet d’une évaluation adéquate. Cette situation devrait s’améliorer avec
l’introduction imminente d’un plan de contrôle de qualité à l’échelle
européenne pour la mesure du taux de cystine dans les globules blancs.
Les laboratoires investissent des ressources considérables pour
essayer de fournir des mesures de cystine leucocytaire exactes et précises.
Cependant, lorsqu’il s’agit d’évaluer le bénéfice thérapeutique de Cystagon™ chez un patient donné ou dans des études incluant
l'ensemble des patients, ce sont la coopération et l’exactitude de
l'information fournie par le patient quant à l'observance thérapeutique et au
délai entre la dernière dose et le prélèvement sanguin, qui revêtent la plus
grande importance.
